链球菌溶血素O的表达、纯化及生物活性鉴定

摘要

目的 重组表达链球菌溶血素O(SLO),纯化后验证其生物学活性.方法 合成目的基因,采用聚合酶链反应扩增、酶切连接的方式构建SLO-pET28a载体,经酶切和测序验证后,转化大肠杆菌BL21 (DE3)中,经诱导表达条件优化,采用镍亲和柱和分子筛纯化SLO.分别检测重组SLO和天然SLO对试剂盒校准品的响应情况和与临床样本匹配程度.结果 成功构建了SLO-pET28a-BL21 (DE3)菌株,在OD600=0.8时,25℃,0.4 mmol IPTG诱导,大于90％目的蛋白会可溶性表达.纯化后SLO纯度大于95％.重组的SLO与提取的SLO对试剂盒校准品的响应相当,与临床样本的匹配程度一致.结论 重组SLO的生物学活性与提取相当,为检测血清中的抗链球菌溶血素O奠定了基础.