不同细胞因子组合对人自然杀伤细胞体外高纯度扩增的实验研究

摘要

目的探讨人自然杀伤细胞（NK）高效扩增培养技术,以获得一种优化的诱导扩增临床应用级别NK细胞的方法。方法提取健康人外周血单个核细胞（PBMCs）,应用免疫磁珠分选法（MACS）阴性分离出高纯度的CD3-CD56+CD16+NK细胞,采用X-VIVO培养基,在均含有白细胞介素（IL）-2、CD3单抗的基础上用不同的细胞因子组合对其进行体外扩增和诱导。采用细胞计数法、流式细胞术免疫表型分析比较NK细胞增殖后的数量与NK细胞纯度。结果 IL-7/IL-15/IL-21的优化组合刺激NK细胞增殖的效果为最佳,培养18 d可使经免疫磁性珠阴性纯化的NK细胞扩增124倍,使未经纯化的PBMCs细胞增殖108倍。在NK细胞纯度方面,培养18 d可使经免疫磁性珠阴性纯化的NK细胞扩增后的CD3-CD16+CD56+NK细胞纯度达81.5%,CD3+CD16+CD56+NK细胞阳性率为10.3%,NK细胞总纯度为91.8%;使未经纯化的PBMC细胞扩增后的CD3-CD16+CD56+NK细胞纯度达22.1%,CD3+CD16+CD56+NK细胞阳性率为33.5%,NK细胞总纯度为55.6%。而单用不同细胞因子IL-7、IL-15、IL-21对NK细胞扩增数量和纯度均有所不同。结论采用X-VIVO培养基,在IL-2、CD3单抗的基础上加IL-7/IL-15/IL-21的优化组合刺激NK细胞增殖的数量和纯度达到最佳效果,所产生的NK细胞质量可满足临床细胞免疫治疗抗肿瘤应用的需要。