人信号转导抑制分子突变重组质粒的构建及鉴定

摘要

目的构建人细胞因子信号转导抑制分子（SOCS）3编码区（CDS）和3’非编码区（UTR）突变基因重组真核表达质粒。方法以pEGFP-C1-SOCS3野生型表达质粒为模板,PCR方法扩增获得野生型SOCS3 CDS和3’UTR基因的序列。根据SOCS3 mRNA与miR-155预测结合靶点,分别设计3个SOCS3突变型:3’UTR-1、3’UTR-2和CDS。通过融合PCR方法将获得的SOCS3突变基因上、下游片段连接,再将融合片段定向克隆到pEGFP-C1表达载体上,筛选重组阳性菌株,提取重组质粒,利用PCR方法和核酸序列测定验证重组质粒构建的正确性。结果成功构建人SOCS3 CDS和3’UTR区突变基因重组表达质粒。结论构建的突变重组质粒将为进一步探讨人SOCS3和miR-155相互作用的研究提供实验依据。