人类细胞系基因表达中校正因子的选择

摘要

目的 以人类6种细胞系为研究对象,确定基因表达研究中最佳的校正因子.方法 收集用苯并芘、过氧化氢、紫外线对应处理的H1299、U251、HUVEC,同时以无任何处理的这3种细胞为对照组,上述细胞的融合率均为70％;并收集无任何处理、融合率分别为100％、70％的293T、HepG2、HeLa细胞.细胞计数后,向每种细胞系中加入其1/10数目的大鼠肝细胞,混合均匀后抽提总RNA、反转录合成cDNA第一链、绝对定量PCR.借助大鼠肝细胞中Polr2a的表达量校正固有实验误差,分析比较不同分组间各校正因子间的表达稳定性.结果 定量数据经校正、分组分析后,得出变异系数最小的3种校正因子,分别为18SrRNA、总RNA、POLR2A.结论 POLR2A更适合被选作基因表达研究中的校正因子.