肠道病毒71型衣壳蛋白VP1的原核表达和纯化及其抗原性和免疫原性的验证

摘要

目的探究利用大肠埃希菌原核表达系统表达的肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白VP1的抗原性和免疫原性。方法将EV71 H3-TY株的VP1基因通过PCR扩增,并引入NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点,定向克隆至pET44a-EV71 VP1表达载体,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,并用IPTG诱导VP1的表达。然后将表达的重组VP1（rVP1）经超声、离心和Ni-NTA亲和层析柱纯化并透析复性,用Western免疫印迹法和先前建立的夹心ELISA等方法检测其抗原活性,同时用rVP1免疫兔子并通过测定其诱导的特异性抗体水平来确定其免疫原性。结果 rVP1在大肠埃希菌中主要表达于包涵体中,但能被顺利且有效地纯化和复性。SDSPAGE显示表达的rVP1相对分子质量约为34 000,与预期大小相符。纯化的rVP1可分别与兔抗EV71多克隆抗体、大鼠抗EV71 VP1单克隆抗体（单抗）和小鼠抗EV71 VP1单抗进行特异性免疫应答。rVP1免疫兔诱导产生的特异性抗体效价高达729000,高于本底效价,且差异有统计学意义（t=2.646,P＜0.01）。结论EV71 VP1在大肠埃希菌原核表达系统中得以成功表达,纯化的rVP1具有良好的抗原活性和免疫原性。