配对相关的同源异型框1导入棕色脂肪干细胞构建生物起搏

摘要

cqvip:目的:探讨过表达配对相关的同源异型框1(Prrx1)是否能诱导棕色脂肪干细胞(BADSC)向类窦房结细胞分化,构建生物起搏。方法:分离培养大鼠BADSC,分别转染带有GFP的空载腺病毒(Ad-GFP组)和带有Prrx1的腺病毒(Ad-Prrx1组)。光镜下观察细胞形态和荧光表达强度,Western blot、实时聚合酶链反应检测窦房结细胞相关的起搏蛋白(HCN4)和转录因子[TBX18、胰岛素基因增强子结合蛋白1(ISL-1)、Pitx2]的表达水平,膜片钳技术检测起搏电流I_f,免疫荧光技术检测细胞HCN4、TBX18和ISL-1的表达。结果:Ad-Prrx1组的起搏相关因子TBX18、ISL-1、HCN4的mRNA和蛋白表达水平均明显高于Ad-GFP组,而Pitx2的mRNA表达水平明显降低(P均<0.05)。膜片钳记录到BADSC的I_f电流,且该电流能被4 mmol/L CsCl阻断。免疫荧光显微镜下可见Ad-Prrx1组Prrx1与TBX18、ISL-1、HCN4在BADSC中共表达,而Ad-GFP组未发现有上述起搏相关蛋白共表达。结论:过表达Prrx1能诱导BADSC分化为类窦房结细胞。