心瓣膜组织工程中种子细胞原代联合培养的实验研究

摘要

目的:探讨体外原代联合培养、扩增,鉴定同一来源的人血管内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞的方法,为组织工程心脏瓣膜的构建提供理想的种子细胞.方法:无菌条件下取冠状动脉旁路移植术中剩余大隐静脉3 cm～8 cm,组织块培养法原代培养混合血管细胞,DMEM培养液培养、扩增混合血管细胞.倒置显微镜、免疫组化方法对内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞进行鉴定.结果:倒置显微镜显示原代细胞及经传代培养后的细胞,呈现内皮样细胞、成纤维样细胞混合生长的特征.免疫细胞化学检测示内皮细胞Ⅷ因子、平滑肌细胞α-肌动蛋白、成纤维细胞纤维连接蛋白相关抗原呈阳性反应.细胞经3～4次传代,细胞数量可增殖达到8×106～10×106. 结论:使用组织块法原代培养可获得内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞,三种细胞经体外联合培养、传代可以达到组织工程心脏瓣膜种子细胞的足够数量.