骆驼纳米抗体随机突变噬菌体展示文库的构建与质量分析

摘要

目的 构建人工突变的噬菌体展示文库并与天然噬菌体展示文库序列对比,进而对人工突变的噬菌体展示文库的质量进行科学评价,为纳米抗体的进一步改造提供鉴。方法 对结合人卵泡刺激素受体（FSHR）的纳米抗体的抗原互补决定区3（CDR3）进行NNY定点饱和突变,合成VHH06-ΔCDR3随机突变DNA。将突变DNA序列连接到载体pMECS上,构建VHH06-ΔCDR3突变噬菌体展示文库。通过DNA测序和分析,比较该文库与FSHR免疫的VHH噬菌体展示文库的多样性和CDR3区的氨基酸分布。采用FSHR对文库进行6轮亲和筛选,测定筛选后克隆的富集程度。结果 按照NNY突变原则,合成了长度为16个氨基酸的CDR3随机突变基因库。成功构建了库容量为7.36×108 cfu/ml的VHH06-CDR3随机突变噬菌体展示文库。多克隆与单克隆phage酶联免疫吸附实验结果显示,经过6轮筛选,输出噬菌体与FSHR的结合明显得到富集,但获得的克隆与FSHR没有明显结合。结论 VHH06-ΔCDR3随机突变噬菌体展示文库尽管具有序列多样性,但由于CDR3缺乏功能多样性,导致其在亲和筛选中不利于获得目标抗体。