LncRNA H19对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞的影响及其机制

摘要

目的 研究LncRNA H19对肺炎链球菌(SP)诱导的肺泡上皮细胞的细胞活性、炎性因子及凋亡的影响及其作用机制.方法 用1×108 CFU/ml的肺炎链球菌(SP)培养A549细胞作为SP组,正常培养细胞作对照(control)组;将si-con、si-H19质粒转染至A549细胞中作为si-con组、si-H19组;再用1×108 CFU/ml的SP培养,作为SP+si-con组和SP+si-H19组;si-H19分别与anti-miR-con、anti-miR-130 a-3 p共转染至A549细胞中,再用1×108 CFU/mL的SP培养,作为SP+si-H19+anti-miR-con组和SP+si-H19+anti-miR-130 a-3 p组.qRT-PCR检测miR-130 a-3 p和H19表达水平;Western Blot检测IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测肺泡上皮细胞A549增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光素酶报告基因检测实验检测H19和miR-130a-3p的靶向关系.结果 SP诱导的A549细胞中H19、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平显著升高,细胞活性显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05);敲减H19后SP诱导的A549细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平显著降低,细胞活性显著升高,凋亡率显著降低(P<0.05).与miR-con组相比,miR-130a-3p组转染H19野生型表达载体的A549细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而转染H19突变型表达载体的A549细胞的荧光素酶活性差异不显著.相较于si-con组,si-H19组miR-130 a-3 p表达水平显著升高,与SP+si-H19+anti-miR-con组相比,SP+si-H19+anti-miR-130 a-3 p组miR-130 a-3 p表达水平显著降低,IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平显著升高,细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05).结论 敲减LncRNA H19可通过上调miR-130 a-3 p提高肺炎链球菌(SP)诱导的A549细胞活性,抑制炎性因子的表达,抑制细胞凋亡.