Qβ噬菌体RNA复制酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

摘要

构建了带有Qβ噬菌体RNA复制酶cDNA基因的重组表达质粒pKK-Rep,采用电泳分析的方法考察了不同浓度的IPTG、不同的葡萄糖浓度对pKK-Rep在E.∞l¨M109中表达RNA复制酶蛋白的影响.结果表明,0.01mmol/LIPTG可以有效诱导pKK-Rep表达RNA复制酶蛋白,但表达的RNA复制酶蛋白大多数为不溶性蛋白.在培养基中添加0.02%的葡萄糖对该RNA复制酶蛋白的组成型表达无明显影响,但当葡萄糖浓度增加至0.04%～1.0%时,这种组成型表达量显著降低.采用MDv-poly(+)RNA作为模板来体外检测可溶性表达蛋白的活性,结果表明其具有体外特异扩增RNA模板的活性.