丙肝病毒融合抗原基因NS_3-C定点整合入衣藻叶绿体基因组的研究

摘要

用ＰＣＲ 方法从丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） ｃＤＮＡ 文库中克隆了两段ＤＮＡ 片段，即ＨＣＶ 基因组非结构ＮＳ３区抗原基因（约０．７ ｋｂ）和核心抗原Ｃ区抗原基因（约０．６ ｋｂ）的ｃＤＮＡ 片段。在两段ｃＤＮＡ 间加入连接肽Ｓｅｒ－ Ｐｒｏ－ Ｇｌｙ－ Ｓｅｒ 的密码子序列，构建成融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ。将该融合基因与衣藻叶绿体基因ａｔｐＡ 的启动子和ｒｂｃＬ 基因的３′末端连接，得到丙肝病毒融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ表达盒，再将该表达盒与选择标记基因ａａｄＡ 表达盒和衣藻叶绿体基因组同源片段连接，构建成衣藻叶绿体转化载体ｐＳＳ６。基因枪法转化衣藻叶绿体，经壮观霉素筛选获得转化再生的单藻落，对转基因衣藻的ＰＣＲ 和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交分析表明，融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ已整合到衣藻叶绿体基因组中。