控制花色的细胞色素P450基因的cDNA克隆及限制性内切酶图谱分析

摘要

提取云南的一种矮牵牛的总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）作为引物反转录合成ｃＤＮＡ第一链。以此为模板，用参照国外报道的矮牵牛细胞色素Ｐ４５０基因ｃＤＮＡ序列而自行设计并合成的一对寡核苷酸引物进行ＰＣＲ扩增，并将其产物纯化后直接克隆到ｐＧＥＭＴ载体系统中，转化大肠杆菌ＤＨ５α，在Ｘｇａｌ平板上筛选白色菌落，经ＳｐｈⅠ和ＮｏｔⅠ双酶切，鉴定所得的重组质粒中含有１５８０ｂｐ左右的ＰＣＲ扩增片段。采用ＰｖｕⅡ、ＨｐａⅠ、ＸｈｏⅠ、ＥｃｏＲＶ、ＮｄｅⅠ、ＮｓｉⅠ等６种限制性内切酶进行酶切图谱分析鉴定，表明所克隆的矮牵牛细胞色素Ｐ４５０基因ｃＤＮＡ序列与国外迄今所报道的一例该基因的ｃＤＮＡ酶切图谱一致，提示了该基因在进化上的保守性。目前我们正在进行含该基因的植物表达载体的构建，准备花卉的转基因研究，探索产生某些蓝色花卉的可能性。