白氏文昌鱼单个体基因组BAC文库的构建

摘要

隶属于头索动物亚门的文昌鱼是现存生物中最近似于脊椎动物亚门直接祖先的一个类群,具有重要的进化地位,是研究脊椎动物原始祖先的重要材料和模式动物.随着文昌鱼实验室连续繁殖的成功,全基因组测序成为中国文昌鱼模式化急需完成的工作之一.文章从单条雄性白氏文昌鱼精巢组织中提取高质量的基因组DNA,经EcoR Ⅰ限制性内切酶和EcoR Ⅰ甲基化酶酶切,脉冲场电泳选择合适酶切DNA片段,连接线性磷酸化的载体pCC1BAC,转化大肠杆菌EP1300 E coll,构建了含有44 706个克隆的全基因组BAC(Bacterial artificialchromosome)文库,该文库平均插入片段80 kb,具有9倍的基因组覆盖率,基本能够满足功能基因等研究需要,为中国文昌鱼全基因组测序打下基础.