大豆查尔酮还原酶基因CHR1的功能研究

摘要

为了验证查尔酮还原酶基因CHR1在大豆苷元合成中的作用,文章克隆了CHR1基因并构建了RNA干扰表达载体pCPB-CHRl-RNAi,将载体转化受体大豆品种“吉农28”中,以期抑制CHR1基因的转录.通过农杆菌介导的遗传转化和PCR检测得到4株To代阳性植株,13株T1代阳性植株.Southern blotting结果表明,功能元件以单拷贝的形式整合到大豆的基因组中.利用实时荧光定量PCR法(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)测定CHR1基因在mRNA水平上的表达量,结果表明,转基因大豆植株中CHR1的表达量与未转化的受体大豆相比降低了60％～99％;高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)检测到合成大豆苷元过程中的前体物质异甘草素的含量降低了38.7％.该RNA干扰机制在转录水平上抑制了CHR1基因的表达.