circ_DONSON靶向miR-671-5p影响肺癌细胞放射敏感性的实验研究

摘要

目的:探讨circ_DONSON对肺癌细胞放射敏感性的影响及可能机制。方法:收集43例肺癌组织和癌旁组织,实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RTqPCR)法检测组织中circ_DONSON和微小RNA-671-5p(microRNA-671-5p,miR-671-5p)表达。体外培养肺癌细胞A549,经不同剂量(2 Gy、4 Gy)X-ray照射后,RT-qPCR法检测细胞中circ_DONSON和miR-671-5p表达。分别转染si-NC、si-circ_DONSON、miR-NC、miR-671-5p mimic,或共转染sicirc_DONSON与miR-671-5p inhibitor至A549细胞,再用4 Gy X-ray照射后,细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法和流式细胞术分别检测细胞增殖活性和细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞集落形成数,蛋白质印迹法检测细胞中活化的半胱天冬酶-3(Cleaved-caspase3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_DONSON与miR-671-5p调控关系。结果:肺癌组织中circ_DONSON的表达量为4.27±0.38,高于癌旁组织中circ_DONSON的表达量(0.80±0.13,P<0.05),而miR-671-5p的表达量为0.37±0.07,低于癌旁组织中miR-671-5p的表达量(0.37±0.07,P<0.05)。与对照组比较,肺癌细胞A549经不同剂量(2 Gy、4 Gy)X-ray照射后,细胞中circ_DONSON表达升高(3.07±0.142 Gy/3.69±0.124 Gy比1.00±0.00,P<0.05),而miR-671-5p表达降低(0.23±0.022 Gy/0.45±0.034 Gy比1.00±0.00,P<0.05)。与对照组或转染si-NC的A549细胞比较,转染si-circ_DONSON的A549细胞经4 Gy X-ray照射后,细胞增殖活性和集落形成数降低[0.48±0.04比1.04±0.11、1.01±0.09;(41.33±1.70)个比(85.67±2.05)个、(86.33±1.25)个;P<0.05],而细胞凋亡率和细胞中Cleaved-caspase3蛋白表达均升高[(31.18±1.39)%比(14.24±0.80)%、(14.30±0.84)%;0.90±0.06比0.41±0.04、0.40±0.05;P<0.05]。与对照组或转染miR-NC的A549细胞比较,转染miR-671-5p mimic的A549细胞经4 Gy X-ray照射后,细胞增殖活性和集落形成数降低[0.63±0.05比1.01±0.11、1.00±0.11;(52.67±2.05)个比(85.00±2.45)个、(84.00±1.63)个;P<0.05],而细胞凋亡率和细胞中Cleaved-caspase3蛋白表达均升高[(28.22±1.47)%比(14.42±0.88)%、(14.61±1.02)%;0.77±0.04比0.40±0.03、0.41±0.05;P<0.05]。circ_DONSON可靶向结合miR-671-5p,且转染si-circ_DONSON的A549细胞中miR-671-5p表达明显高于转染si-NC的细胞(4.66±0.21比1.00±0.02,P<0.05)。与转染si-circ_DONSON的A549细胞比较,共转染si-circ_DONSON与miR-671-5p inhibitor的A549细胞经4 Gy X-ray照射后,细胞增殖活性和集落形成数升高[0.91±0.06比0.50±0.04;(71.00±2.83)个比(40.67±2.49)个;P<0.05],而细胞凋亡率和细胞中Cleaved-caspase3蛋白表达均降低[(20.66±0.96)%比(31.13±1.57)%;0.57±0.03比0.90±0.07;P<0.05]。结论:沉默circ_DONSON可能通过靶向上调miR-671-5p增强肺癌细胞A549的放射敏感性。