miR-214-5p靶向SEMA4 C基因调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和侵袭的分子机制

摘要

目的 研究miR-214-5p对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLSs)增殖和侵袭的影响和潜在的分子机制.方法 根据转染物将RA-FLSs细胞分为miR-NC组、miR-214-5p组、si-NC组、si-SEMA4C组、anti-miR-NC组、anti-miR-214-5p组、miR-214-5p+pcDNA-NC组和miR-214-5p+pcDNA-SEMA4C组.qRT-PCR检测RA-FLSs中SEMA4C mRNA和miR-214-5p的表达,Western Blot检测SEMA4C、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,CCK8法和Transwell实验分别测定RA-FLSs细胞增殖率和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-214-5p与SEMA4C间的调控关系.结果 与control组比较,在RA-FLSs细胞中miR-214-5p的表达量显著下降(P<0.05),而SEMA4C mRNA和蛋白的表达量显著升高(P<0.05);与对照miR-NC和si-NC组比较,miR-214-5p组和si-SEMA4C组RA-FLSs细胞的增殖率和侵袭细胞数均下降,CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告系统结果显示,miR-214-5p靶向负调控SEMA4C蛋白表达;与miR-214-5p+pcDNA-NC组比较,miR-214-5p+pcDNA-SEMA4C组RA-FLSs细胞增殖率和侵袭细胞数均升高,CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-214-5p通过靶向SEMA4C基因调控RA-FLSs细胞增殖和侵袭,miR-214-5p有望成为类风湿性关节炎分子诊断和治疗的靶点.