NF-KappaB SiRNA修饰树突状细胞对大鼠皮肤移植免疫耐受诱导的研究

摘要

目的:探讨NF-KappaB(NF-κB)SiRNA修饰供体树突状细胞(DC)对异基因大鼠间皮肤移植术后免疫耐受诱导的效果,从而为该基因治疗方法应用于临床皮肤移植提供依据.方法 1.PGPU6/GFP/Neo-siRNA–NF-κB 表达载体的构建.2.体外SD大鼠骨髓干细胞体外定向诱导扩增培养DC后,将 NF-κB SiRNA及阴性对照SiRNA以LipofectamineTM2000 转染入大鼠DC,行 RT- PCR 和Western blot 检测.3.NF-κB SiRNA转染的DC 2×106个/只经尾静脉注入受鼠体内,分为对照组,未修饰DC组,NF-κB SiRNA基因修饰DC组,5天后行皮肤移植,移植5天后部分受鼠移植皮肤送病理检测,其余观察皮肤存活时间,TUNEL法检测移植皮肤淋巴细胞调亡情况.结果 构建的PGPU6/GFP/N-eo-siRNA-NF-κB通过脂质体转染到DC后,能明显抑制NF-κB基因和蛋白的表达.目的基因修饰组皮肤移植存活情况明显优于其它两组.结论 PGPU6/GFP/Neo-siRNA–NF-κB表达载体成功转染DC.NF-κB SiRNA修饰的供体DC预处理受体(经尾静脉注入),可明显延长移植皮肤的存活时间.