结核分枝杆菌Ag85B真核表达质粒的构建及其表达

摘要

目的构建结核分枝杆菌Ag85B真核表达质粒并表达.方法从结核分枝杆菌(H37Rv)基因组中扩增出Ag85B编码基因,经限制性内切酶消化后,定向克隆入pcDNA3.1(+)中.采用脂质体法将pcDNA/Ag85B转染COS-7细胞,采用RT-RCR、ELISA和斑点印迹法检测其表达.结果扩增出Ag85B基因,经双向DNA序列测定,与Genbank注录的序列一致;重组质粒转染COS-7细胞后经检测证实,该基因能在真核细胞中表达.结论成功地构建了pcDNA/Ag85B质粒,其在真核细胞中表达的蛋白具有良好的抗原性.