蓝莓Vco-miR_n10的克隆及对干旱的响应分析

摘要

[目的]MicroRNA(miRNA)是一类内源单链非编码的小分子RNA,在动植物中参与转录后基因表达调控.Vco-miR_n10是蓝莓中的新型miRNA,目前尚未见该miRNA功能方面的报道.本研究对蓝莓Vco-miR_n10进行了初步功能分析.[方法]基于前期蓝莓小RNA高通量测序结果,对鉴定到的蓝莓新型miRNA(Vco-miR_n10)的前体序列(224 nt)进行克隆与测序,并利用mfold在线软件对其前体序列的二级结构进行预测.采用Gateway系统构建了35Spro::pre-Vco-miR_n10表达载体并转入野生型拟南芥中,对其正常生长及300 mmol/L甘露醇处理条件下的表型进行观察与分析.[结果]克隆获得了Vco-miR_n10的前体序列,该序列能够折叠形成较完美的茎环结构且仅有2个错配碱基对.Vco-miR_n10的成熟体序列位于3'茎臂上.观察正常生长条件下的转基因植株并无显著的表型变化.而在300 mmol/L甘露醇模拟的干旱条件下,Vco-miR_n10-24与Vco-miR_n10-52的发芽率(33.53％、37.69％)和绿苗率均显著低于野生型(发芽率67.72％、绿苗率66.33％).[结论]蓝莓Vco-miR_n10能够响应甘露醇模拟的干旱胁迫,并降低拟南芥对干旱的耐受能力,影响发芽率和绿苗率,说明蓝莓Vco-miR_n10可能在植物响应干旱胁迫过程中发挥一定的调控功能.