iTRAQ试剂结合二维液相色谱质谱联用技术对蛋白质进行鉴定和比较定量研究

摘要

采用相对和绝对定量同位素标签(iTRAQ)对蛋白质进行鉴定和比较定量,其能进一步比较更为复杂样品的蛋白质表达水平.将蛋白质样品用胰蛋白酶酶解,分别被几种分子量相等的iTRAQ标签中的一种标记,然后混合.混合后将被标记的多肽通过强阳离子交换色谱(SCx)和纳升反相色谱(RP)分离,结合质谱(MS)分析.结果表明,在保证95％的置信度下,共有54个唯一肽段和6个标准蛋白质被成功鉴定,包括大肠杆菌的β-半乳糖苷酶、β-乳球蛋白、小鸡溶菌酶,人血清铁传递蛋白的蛋白质定量表达水平在样品A和样品B中未表现出显著差异,但样品B中牛血清白蛋白(BSA)和α-乳白蛋白的数量均为样品A的一半.该结果与预期试验结果相符,且重复性好,表明此方法具有稳定性和可重复性,适用于蛋白质鉴定和表达水平的比较定量研究,此外,其能显著提高蛋白质混合物的研究通量.