产GABA发酵乳杆菌的筛选、发酵条件优化及其谷氨酸脱羧酶基因的克隆

摘要

从酸菜汁中分离到一株具有谷氨酸脱羧酶活力的乳酸菌YS2,经过16S rDNA序列分析鉴定为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum).YS2在含l％L-谷氨酸钠的MRS培养基中,GABA的产量达到4.37 g/L.对YS2产GABA的碳源、氮源、初始pH进行了初步优化,确定最佳条件为:以蔗糖为主要碳源,以蛋白胨和牛肉膏为氮源,初始pH 6.0,在此条件下,GABA产量达到5.68 g/L.通过PCR顺利地扩增出了YS2菌株的谷氨酸脱羧酶gadB基因,将PCR产物与表达载体pEASY-E1连接.测序结果表明,YS2的谷氨酸脱羧酶与Lactobacillus fermentum F-6的谷氨酸脱羧酶序列一致性达到99％.重组酶与组氨酸标签融合表达,经镍柱亲和层析纯化出融合蛋白,电泳显示出56 kDa的目的条带,纯化的重组酶表现出了酶活性(1.06 U/mg).