TGF-β1基因转染BM-MSC对肝癌转移潜能影响的实验研究

摘要

目的 观察经TGF-β1基因修饰的人骨髓间充质干细胞(hMSC)对高转移潜能肝癌细胞(MHCC97-H)增殖能力及侵袭能力的影响.方法 ①利用Gateway Technology法构建TGF-β1慢病毒载体,eGFP为报告基因,转染hMSC,病毒滴度测定转染率;②Transwell法检测hMSC与肝癌细胞共培养实验,下室加入500μl含20％FBS的培养基和1×104个基因修饰前后hMSC,上室加入100μl浓度为1×106个/ml的人高转移肝癌细胞(MHCC97-H)悬液,小室置于37℃,5％CO2培养箱内培养48 h,结晶紫染色,细胞计数,检测MHCC97-H细胞侵袭能力的变化;③CCK-8法检测与hMSC共培养前后MHCC97-H增殖能力的变化;④PCR法检测转基因hMSC与MHCC97-H细胞共培养前后转移相关因子基因α-V,肿瘤生长因子TGF-β1和肿瘤凋亡因子PDCD4等基因表达.结果 (1)hMSC TGF-β1过表达组细胞的转导率达90％以上.(2) MHCC97-H细胞增殖能力检测结果:①MHCC97-H与hMSC细胞共培养后,MHCC97-H增殖能力增强;②hMSC TGF-β1基因过表达组对MHCC97-H细胞增殖具有抑制作用.(3)MHCC97-H细胞侵袭能力检测结果:①MHCC97-H与hMSC细胞共培养后,侵袭能力增强;②hMSC TGF-β1基因过表达组对MHCC97-H细胞侵袭能力具有明显的抑制作用.(4) Q-PCR检测结果:①hMSC基因转染组TGF-β1表达明显增高;②hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞TGF-β1基因表达明显低于对照组;③hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞α5基因表达降低;④hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞PDCD4基因表达降低.结论 TGF-β1基因hMSC过表达组细胞MHCC97-H细胞的转导率达90％以上;转基因hMSC具有抑制MHCC97-H细胞增殖和细胞侵袭的作用.