人可溶性APO2L/TRAIL基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要

目的利用基因工程技术原核表达人可溶性APO2L并复性纯化成具生物活性形式。方法用PCR方法扩增APO2LcDNA(密码子114～281)并克隆至表达载体，重组体转化大肠杆菌JF1125摇瓶发酵，筛选高表达克隆于发酵罐经温度诱导表达。经盐酸胍溶解，空气氧化法稀释复性，超滤，Q-SepharoseFF阴离子交换柱层析等方法纯化人可溶性APO2L。利用流式细胞术检测产物对细胞的诱导凋亡活性。结果表达产物约占菌体总蛋白质的20%并在菌体内形成了包涵体，SDS-PAGE鉴定表达产物相对分子质量约21000。经上述纯化蛋白质纯度达90%以上，蛋白质可溶性好。观察到人可溶性APO2L诱导人宫颈癌HeLa细胞发生明显的凋亡。结论原核表达产物与真核表达产物一样具明显的诱导肿瘤细胞凋亡活性。