体外培养成骨细胞成纤维生长因子23表达及其对激素的反应

摘要

目的 研究体外培养大鼠成骨细胞在不同分化阶段的成纤维生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)基因表达水平,并观察其对钙、磷、甲状旁腺激素(PTH)和1,25二羟维生素D[1,25(OH)_2D_3]的反应.方法 酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,于细胞半汇合、汇合、基质堆积和矿化4个阶段收获细胞,Trizol一步法提取总RNA,Real-time PCR法检测其FGF23 mRNA水平,并通过其碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(bone gla-protein,BGP)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的mRNA表达水平变化评价成骨细胞分化状态.进一步取汇合细胞,分别用3.2 mmol/L氯化钙、4.4 mmol/L β甘油磷酸钠(βGP)、10~(-9) mol/L rhPTH(1-34)和10~(-8) mol/L 1,25(OH)_2D_3作用3 d,检测其FGF23的mRNA表达变化,结果与空白对照组比较.结果 体外培养成骨细胞生长良好,成骨细胞FGF23的mRNA水平在汇合时显著上调,为半汇合阶段的7.5倍(P<0.001),于基质堆积和矿化时期回落至半汇合水平,提示成骨细胞FGF23的表达呈阶段特异性.10~(-8) mol/L 1,25(OH)_2D_3刺激后,FGF23的mRNA表达水平明显上调,约为对照组的16倍(P<0.001);而CaCl_2、βGP、PTH刺激后,FGF23的mRNA表达水平与对照组相比,差异无统计学意义.结论 FGF23的表达与成骨细胞的分化状态有关,1,25(OH)_2D_3能强烈刺激体外培养成骨细胞FGF23的表达.