诱发和检测牛精子顶体反应的一种简易方法

摘要

将冷冻保存的公牛精子解冻,冲洗,以高浓度悬浮于K-3培养液中。K-3溶液含有NaCl,CaCl_2和NaHCO_3。将此悬液预先孵育在39.5℃密闭玻璃管中,然后以台盼兰-姬姆萨(简称TG)染色,用田鼠试验以确定发生了顶体反应的精子。TG染色的涂片显示出四种类型不同着染的精子。发现仅在顶体后区未着色或淡兰色,以及顶体区未着色或部分浅红—深红着色的这两种精子的百分率与去透明带田鼠卵的穿透率之间有显著的正相关关系(r=0.732,P<0.05,n=12)。这样的精子被认为是发生了顶体反应的。公牛A与B,其精子样品预先分别在K-3培养液中孵育2小时和1～2小时,得到了很高的精子顶体反应的百分率(A 37％,B 43.8％～49.2％)和较高的卵子穿透率(A91.7％,B85.4％～97.7％)。这一结果表明公牛精子培养在只含NaCl_2、CaCl_2、NaHCO_3的培养液中,密封玻璃管中39.5℃孵育,即可发生顶体反应。TG方法可用于鉴定发生了顶体反应的精子。