Picrophilus Torridus嗜热酯酶的克隆表达及性质研究

摘要

目的 目的以Picrophilus torridus DSM9790基因组为模板,克隆嗜热酯酶EstPt 1的基因,实现其在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达,并对重组EstPt 1进行酶学性质表征.方法 利用PCR扩增,获得EstPt 1基因,连接到pET-28a(+)质粒,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,构建重组工程菌株.通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),对硝基苯酚法(pNPB),薄层色谱(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)对EstPt 1的性质进行研究.结果 EstPt 1成功表达,分子量为35 kD;最适反应温度为85℃,最适pH 9.0,有良好的热稳定性和酶活,能在24 h内完全降解5 mmol/L邻苯二甲酸二丁酯(DBP).结论 重组EstPt 1有很强的高温耐受性和稳定性,以及良好的DBP降解活性.