家兔胚胎细胞核移植的研究

摘要

本研究以兔为实验材料，对细胞核过程中显微操作、电融合、电活化以及移核胚的培养等基本问题进行了研究。对兔进行PMSG－hCG超数排卵，收集成熟母细胞和16－细胞胚；后者经胰蛋白酶消化，去除胶膜和透明带，在不含Ca62+、Mg2+的分离中分成单个卵裂球；然后，分别对两者做CB预处理；首次尝试采用WQilladsen法，去除卵母细胞核、并将单个卵裂球注入透明带，同时、与McGrath-Solter法进行比较；通过电融合使供体核进入去核的卵母细胞内；将所得移核胚在体外或在中间内体内培养并观察。结果表明：一、Willadsen法与McGrath-Solter法比较，核移植操作的成功率及以后的电融合率均无明显差异（Tab.1)。相对于后者，Willadsen法更简便、易于掌握并提高去核率。二、hCG超排注射后13－15h，观察卵母细胞发现：其中，67．8％保留有第一极体。此时的卵子若去除1／3胞质量，去核率可以达到58．3％。若推迟去核时间，第一极体退化，失去去核标志。三、比较不同电脉冲条件，发现强度为0．63kv/cm，持续160μs的一次电脉冲可获较高移核胚的融合率（70．8％）（Tab.2）；并可使61．1％的成熟卵母细胞活化。四、比较移核胚在体外和在中间有体内两种培养条件，前者只有34．6％能发育到6－8细胞期，而后者有23．0％能发育到桑椹胚或囊胚（Tab.3)。说明：需进一步优化家兔胚体外培养条件。