基于环介导等温扩增技术快速鉴定宽体金线蛭

摘要

[目的]建立中药材宽体金线蛭的环介导等温扩增(LAMP)检测技术,实现对宽体金线蛭及其常见混伪品的快速检测。[方法]针对宽体金线蛭线粒体细胞色素氧化酶I(COI)的基因序列设计LAMP引物。在64°C恒温条件下,用设计的LAMP引物组对水蛭进行LAMP扩增。[结果]LAMP反应结束后,宽体金线蛭均扩增出梯状条带,对照组无条带产生。加入0.2μL荧光染料10000×SYBR GreenⅠ后,宽体金线蛭反应液在自然光下呈绿色(阳性),对照组呈橙色(阴性)。将加入了0.2μL 10000×SYBR GreenⅠ的扩增产物置于紫外灯下观察,结果宽体金线蛭在紫外光下呈绿色荧光(阳性),对照组无绿色荧光产生(阴性)。[结论]利用LAMP技术可实现宽体金线蛭及其常见混伪品的快速鉴别,为水蛭中药材的现场鉴别提供技术支撑。