红毛藻R-藻红蛋白的提取纯化及在Cu^(2+)检测中的应用

摘要

采用纤维素酶法提取红毛藻藻红蛋白,并对其进行纯化。利用Cu^(2+)能使R-藻红蛋白发生荧光猝灭的特性,建立一种荧光检测Cu^(2+)含量的方法。研究结果表明:当提取温度40℃、提取时间5 h、加酶量2.5%时,提取的R-藻红蛋白质量浓度为43.64 mg/mL。使用饱和度为60%的硫酸铵沉淀和DEAE Sepharose FF柱纯化,得到纯度为2.1(A620/A280)的药品级R-藻红蛋白,其对Cu^(2+)有良好的选择性,最佳检测条件为:R-藻红蛋白质量浓度1.2 mg/mL、水浴温度30℃、反应时间15 min、缓冲液pH 7.0,在Cu^(2+)0.5~50μmol/L范围内,相对荧光强度与Cu^(2+)浓度之间存在良好的线性关系,最低检出限(S/N=3)0.06308μmol/L。将此方法用于实际样品中Cu^(2+)含量的检测,样品回收率为94.50%~106.03%。方法具有绿色安全、检测时间短、灵敏度高、选择性好等优势,对水产品中重金属Cu^(2+)含量的检测有广泛的应用前景。