海生红藻多管藻中四种R-藻红蛋白的分离、纯化及多肽组成分析

摘要

本研究用50mmol/L的磷酸缓冲液（pH=7.0）浸泡一种海生红藻多管藻（Polysiphonia urceolata Grev），经过超声波破碎和硫酸铵沉淀，得到藻胆蛋白粗提液。经过DEAE-52离子交换层析分离藻胆蛋白粗提液，得到有电荷差异的四种藻红蛋白（phycoerythrin, PE）和一种藻蓝蛋白（phycocyanin, PC），其中藻红蛋白为主要研究对象。然后经过Sephadex G-150和 Sephacryl S-300凝胶过滤层析对这四种藻红蛋白进行纯化，分别为PE169-1、PE267-1、PE356-2和PE523-2。这四者具有非常相似的吸收光谱和荧光光谱，分别在498 nm、540nm和565 nm左右处都有特征吸收峰，在576 nm处有一个荧光发射峰；四种藻红蛋白中除PE169-1外，其它三种藻红蛋白PE267-1、PE356-2和PE523-2在非变性的PAGE和非变性的IEF中均表现为单一条带，且等电点分别为4.5、4.4和4.4。PE169-1含量较少，非变性的PAGE和IEF、变性的IEF和SDS-PAGE分析表明其可能为藻红蛋白六聚体解离的小分子PE。
　　 PE267-1、PE356-2和PE523-2的SDS-PAGE、变性等电聚焦和二维电泳结果表明：三者均由三种相同的含发色团的有色亚基组成，其分子质量分别为18.4 kDa (α)、20.7 kDa (β)和34.5 kDa (γ)，其比例为3α:3β:1γ，且PE356-2和PE523-2还含有45.7 kDa的无发色团多肽(Lnk45.7)，PE523-2含有62.1kDa的无发色团多肽(Lnk62.1)，其比例分别为6α:6β:2γ:1Lnk45.7，6α:6β:2γ:0.5Lnk62.1，可能的存在形式为(αβ)3-γ-(αβ)3-γ、γ-(αβ)3-γ-(αβ)3-Lnk45.7和γ-(αβ)3-γ-(αβ)3-Lnk62.1。和γ亚基一样，Lnk45.7和Lnk62.1可能作为连接多肽在“杆”结构域连接六聚体R-PE。二维电泳分析表明，α亚基有等电点不同的三种形式，其等电点分别为5.95、5.80和5.65；β亚基五种不同形式，等电点分别为5.56、5.46、5.33、5.25和5.11。这些结果为R-PE六聚体及其构建大型红藻藻胆体“杆”结构域研究提供了有价值的实验资料。本实验建立的层析、PGAE、IFE和二维电泳的方法可应用于其它大型红藻的藻胆蛋白组成研究。

目录

文摘

英文文摘

声明

1 引言

2材料与实验方法

3 实验结果

4 讨论与总结

参考文献

致谢

附录:发表论文情况