弓形虫棒状蛋白ROP54编码基因的生物信息学分析及原核表达

摘要

为了能够获得刚地弓形虫RH株棒状蛋白ROP54的重组蛋白,本研究进行了弓形虫RH株ROP54蛋白编码基因的生物信息分析及原核表达。运用RT-PCR方法扩增刚地弓形虫RH株ROP54蛋白编码基因序列,并连接至pMD-18-T载体,构建出克隆质粒pMD-ROP54后,转化入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,测序后对基因序列进行生物信息分析。将pMD-ROP54及pET-28a经双酶切及连接,构建出原核表达质粒pET-ROP54,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况,Western blot鉴定重组蛋白的反应原性。结果显示,成功扩增出长度约1 440 bp的ROP54蛋白编码基因序列。生物信息学分析显示,测序结果与刚地弓形虫M49株比对同源性为99%。预测ROP54蛋白氨基酸序列1至26个氨基酸为信号肽,亲/疏水性最小值是-2.978,最大值是2.700。成功构建了原核表达质粒pET-ROP54,IPTG诱导后经,SDS-PAGE结果可见约52.94 kDa大小的蛋白表达,且能够被犬抗弓形虫血清识别,具有良好的反应原性。本研究成功获得了重组蛋白ROP54,为ROP54特性及生物学功能研究奠定基础。