小麦根质膜H^+-ATPase的部分纯化

摘要

以小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）根为材料，采用不连续蔗糖密度梯度离心法制备高纯度质膜微囊。质膜经ＴｒｉｔｏｎＸ１００和ＫＣｌ处理后，再用Ｚｗｉｔｅｒｇｅｎｔ３１４增溶Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ，最后用硫酸铵沉淀得到部分纯化的质膜Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ。ＳＤＳＰＡＧＥ结果表明，经过上述步骤纯化，分子量为９４ｋＤ的膜蛋白组分得到富集；与质膜相比，其含量提高１５．７倍。部分纯化的质膜Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ可以水解ＡＴＰ，受Ｋ＋刺激，并被Ｎ，Ｎ′ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｃａｒｂｏｄｉｍｉｄｅ（ＤＣＣＤ）抑制；ＡＴＰ水解活力被Ｎａ３ＶＯ４抑制９５％，但不被ＮａＮ３、ＮａＮＯ３和Ｎａ２ＭｏＯ４抑制。