伪狂犬病病毒变异株UL3、UL46和UL50基因失活株的构建与生物学特性分析

摘要

为探究UL3、UL46和UL50基因对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)毒力的影响,本研究应用En Passant技术,分别对PRV变异株AH02LA的细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome, BAC)的UL3、UL46和UL50起始密码子进行敲除,获得3株基因失活重组BAC:BAC^(PRV-UL3knock)、BAC^(PRV-UL46knock)和BAC^(PRV-UL50knock)。将BAC DNA与带有同源臂的gE/gI序列片段共转染猪睾丸(swine testis, ST)细胞,获得重组病毒:PRV-UL3^(knock)、PRV-UL46^(knock)和PRV-UL50^(knock)。生长动力学试验结果显示UL3、UL46和UL50突变失活株在感染12和36 h滴度显著低于PRV AH02LA亲本株,表明UL3、UL46和UL50可能介导病毒复制。小鼠的致病性试验显示,PRV-UL3^(knock)、PRV-UL46^(knock)和PRV-UL50^(knock)对小鼠的LD_(50)分别为10^(4.44)TCID_(50)、10^(4.5)TCID_(50)和10^(4.05)TCID_(50),与PRV AH02LA相似(LD_(50)为10^(4.91)TCID_(50)),暗示UL3、UL46和UL50基因可能对PRV毒力无显著影响。本研究分析了UL3、UL46和UL50基因对PRV毒力的影响,为PRV致病机制的研究提供了参考。