羟丁基壳聚糖携载CD133抗体温敏膜对内皮祖细胞的影响

摘要

目的研究羟丁基壳聚糖携载CD133抗体温敏膜对外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生长、黏附、迁移及分化的影响。方法(1)用密度梯度离心法取人外周血单个核细胞,培养7 d后收集贴壁细胞进行Dil-乙酰化低密度脂蛋白(acetylated low-density lipoprotein,ac-LDL)和FITC-荆豆凝集素I(UEA-I)双荧光染色鉴定;(2)鉴定后的细胞分3组,分别接种到铺有裸钴铬合金片膜、雷帕霉素药物涂层钴铬合金片膜、复合羟丁基壳聚糖携载CD133抗体温敏膜钴铬合金片膜的培养板中培养,分别记为裸金属组、雷帕霉素组及抗体温敏膜组;(3)取培养7 d的3组细胞计数并采用黏附能力测定实验、transwell小室法分别测定3组细胞的黏附和迁移能力的差异;(4)取培养14 d的3组细胞用实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法测定细胞内内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因含量的表达差异。结果(1)培养7 d的贴壁细胞CD133表达率为(20.65±2.70)%,CD34表达率为(33.90±3.31)%,KDR表达率为(62.98±3.18)%,细胞摄取ac-LDL显红色荧光,与UEA-Ⅰ结合显绿色荧光,双阳性细胞为EPCs,显黄色。(2)EPCs在抗体温敏膜上生长良好,形态正常。与裸金属组、雷帕霉素组相比,抗体温敏膜组EPCs的细胞个数、黏附数量、迁移细胞数量增高,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)RT-PCR示抗体温敏膜上的EPCs eNOS mRNA表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.01),是裸金属组基因含量的2.43倍,是雷帕霉素组基因含量的5.90倍。结论羟丁基壳聚糖携载CD133抗体温敏膜能促进EPCs生长、黏附、迁移及分化,为理想的生物学材料,促进了药物洗脱支架的进展。