增强子结合蛋白α在结肠癌转移中的分子调控机制

摘要

目的探讨增强子结合蛋白α(C/EBPα)在结肠癌转移中的分子调控机制,为防治结肠癌及其转移提供研发方向和临床思路。方法比较Ad C/EBPα感染后在正常的人结肠黏膜上皮细胞株、结肠癌细胞株SW620和LOVO中C/EBPα及相关基因、蛋白的表达差异,用CCK-8法检测SW620和LOVO细胞生长增殖情况,以流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;体外分离人正常结肠上皮细胞和结肠癌细胞株SW620和LOVO以观察其体外存活率;构建实验性结肠癌和肝转移的小鼠模型,部分小鼠分别经瘤内或尾静脉注射导入Ad C/EBPα接受治疗,以进一步明确C/EBPα在体内对实验性结肠癌和肝转移小鼠的作用机制。结果 Ad C/EBPα以MOI400感染结肠癌细胞株SW620和LOVO 4 d后,Westernblot检测K-ras基因表达上调,C/EBPαmRNA和ANXA1蛋白表达明显上调;免疫组化法也显示结肠癌细胞中的C/EBPαmRNA和蛋白表达明显上调,定位在细胞核内。CCK-8法检测SW620和LOVO细胞生长增殖的结果显示,Ad C/EBPα感染7 d后出现明显的生长抑制。Ad C/EBPα感染结肠癌细胞株SW620和LOVO 5 d后,流式细胞仪检测结果表明细胞株凋亡率差异无统计学意义。而体外分离细胞的实验结果表明,Ad C/EBPα感染7 d后,结肠癌SW620和LOVO细胞的存活率明显降低。经C/EBPα治疗实验性结肠癌或肝转移小鼠,发现其能显著抑制瘤体重量和体积,且采用Real-TimeRT-PCR法检测发现经C/EBPα治疗的小鼠其K-ras基因和ANXA1蛋白表达明显低于未经治疗组,提示C/EBPα对结肠癌及其肝转移的作用与Raf/MEK/ERK/MAPK细胞信号通路的激活有关系,从分子水平揭示了C/EBPα的作用机制。结论本研究提示C/EBPα治疗结肠癌转移的分子机制为激活Ras/Raf/MEK/ERK/MAPK细胞信号通路,下调ANXA1表达和K-ras基因,从而抑制肿瘤细胞的增殖、生长和远端转移。