DAB2IP启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其应用

摘要

目的构建并鉴定DAB2IP启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic-DAB2IP-luc,观察Snail在胃癌细胞中对DAB2IP表达调控.方法利用PCR法克隆出DAB2IP启动子序列(1000bp),构建pGL3-Basic-DAB2IP-luc载体并酶切并测序鉴定.检测转染pEGFP-C1-Snail载体对pGL3-Basic-DAB2IP-luc双荧光素酶活性及对DAB2IP的表达水平的影响.结果荧光素酶报告系统结果显示Snail+pGL3-Basic-D A B2I P-l u c组荧光活性明显低于pGL3-Basic-DAB2IP-luc组和空白组(P<0.01;P<0.01),此外,pGL3-Basic-DAB2IP-luc组比空白组的荧光活性更低(P<0.01;P<0.01).荧光定量PCR和Western blot结果显示,转染p EGFP-C1-Snail下调DAB2IP的m RNA和蛋白水平.结论转录因子Snail抑制DAB2IP的转录和表达.具有生物活性的pGL3-Basic-DAB2IP-luc的构建成功为研究DAB2IP在胃癌中转录调控机制提供了重要的研究工具.