基于增殖诱导配体新型抗肿瘤分子的构建及初步筛选

摘要

目的构建针对APRIL的免疫抑制分子,并对其原核表达蛋白进行纯化及活性筛选。方法将可溶性增殖诱导配体(sAPRIL)cDNA进行突变并插入TELTh表位序列,突变体用pQE-80L/DH5α原核表达系统进行表达,表达蛋白经SDS-PAGE鉴定、Ni-NTA亲和层析纯化及Western印迹分析,最后检测纯化蛋白对Raji细胞增殖的影响。结果成功构建并表达了4种sAPRIL突变体:C端引入HELTh表位的sAPRIL突变体(Ⅰ)、N端引入HELTh表位的sAPRIL突变体(Ⅱ)、C端缺失45bp序列并引入HELTh表位的sAPRIL突变体(Ⅲ)、N端缺失45bp序列并引入HELTh表位的sAPRIL突变体(Ⅳ)。SDS-PAGE电泳、Western印迹分析均检测到相应的特异蛋白带。用Ni-NTA系统成功纯化表达的突变体蛋白。细胞试验表明,突变体Ⅰ、Ⅱ纯化蛋白具有明显的促细胞增殖活性,而突变体Ⅲ、Ⅳ纯化蛋白没有促细胞增殖活性。结论在4种sAPRIL突变体中初步筛选到不具有促细胞增殖活性的APRIL免疫抑制分子,为下一步确定该分子的免疫抑制功能奠定了物质基础。