人β防御素4基因原核表达载体的构建及其表达

摘要

人β防御素4(Human β defensin 4,HBD4)是一种具有广谱抗微生物活性的抗菌肽。在人体先天免疫尤其上皮及黏膜防御中起重要作用。本研究用重叠延伸PCR扩增合成HBD4cDNA全长,并克隆入pMD18-T载体,用PCR法扩增HBD4成熟肽(mature HBD4,mHBD4)编码序列并克隆入表达载体pGEX-4T-2中,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导下,表达HBD4与谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)的融合多肽。用酶切鉴定、核酸测序、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳等进行鉴定。结果表明:我们成功合成了HBD4全长编码基因,构建了克隆载体pMD18-T/HBD4和原核表达载体pGEX-4T-2/mHBD4,并在大肠杆菌中成功表达融合蛋白GST-HBD4。