链球菌gordonii FSS2 N-乙酰氨基葡糖苷酶基因的克隆和表达

摘要

目的 :N -乙酰氨基葡糖苷酶 (N -acetylglucosaminidase)是链球菌gordonii六种胞外糖苷酶之一。为研究该酶 ,克隆和表达该基因片段。方法 :将链球菌gordoniiFSS2染色体DNA分离提纯 ,用限制性内切酶Sau 3AI不完全酶切 ,产生长度不等的随机片段 ,琼脂糖凝胶电泳分离和回收 2 - 8kpb的随机片段 ,然后与BamHI线性化及 5’端脱磷处理的载体pUC 18连接 ,转化大肠杆菌XL1-Blue;β—半乳糖苷酶筛选系统及酶切 ,检测插入片段。根据N -乙酰氨基葡糖苷酶与特异人工底物X -GlucNac反应 ,有色物质X被释放原理 ,筛选表达克隆。结果 :共有 6×10 6个转化子 ,约 5 0 %转化子含有插入片段 ;检测到 8个N—乙酰氨基葡糖苷酶表达克隆。结论 :所构建的基因组文库具有完整性 ,该基因在大肠杆菌XL1-Blue中成功表达。