糜酶对大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

摘要

目的探讨糜酶对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响。方法用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠的CFs,采用MTT比色法(A490值)测定细胞数目,流式细胞术分析细胞周期,3H-脯氨酸掺入法测定总胶原合成,RT-PCR检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的表达。结果①糜酶以剂量依赖方式增加CFs的数目。其中15、30和60μg/L组的A490值分别为0.263±0.033、0.348±0.031和0.387±0.026,均高于对照组的A490值(0.201±0.019),并有非常显著性差异(P<0.01)。②随着糜酶作用浓度的增加,CFs在G0/G1期的百分率逐渐减少,S期的百分率和细胞增殖指数逐渐增加。其中15、30和60μg/L组与对照组相比,上述各项指标均有显著或非常显著性差异(P<0.05或P<0.01)。③糜酶以剂量依赖方式增加CFs的3H-脯氨酸掺入量。其中15、30和60μg/L组的3H-脯氨酸掺入量分别为(520±75)、(684±62)和(769±58)cpm/孔,均高于对照组[(435±60)cpm/孔],差异有显著或非常显著性意义(P<0.05或P<0.01)。④随着糜酶作用浓度的增加,CFs的Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达水平均呈递增趋势。其中15、30和60μg/L组的Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的水平均显著高于对照组(P<0.01)。结论糜酶具有促进CFs增殖和胶原合成的作用,提示其可能在心肌纤维化过程中发挥重要作用。