TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测外周血CK19 mRNA

摘要

目的:应用TaqM an实时荧光定量RT-PCR技术,建立定量检测CK19 mRNA的方法。方法:采用RT-PCR从胃癌细胞中克隆CK19片段(230 bp),装入pMD 18-T S imp le载体。纯化质粒,制备荧光定量PCR标准品。应用L ightCyc le荧光定量PCR仪检测标准品、30例正常人外周血和5例肿瘤组织CK19 mRNA。结果:PCR扩增及测序均证实CK19 cDNA片段重组到pMD 18-T载体上,建立了稳定的检测CK19 mRNA的标准,即设定CT值在35个循环之内,检测结果低于100个拷贝数量级为阴性标本。结论:采用TaqM an实时荧光定量RT-PCR技术检测外周血CK19 mRNA是一种稳定可靠的方法。