猪脑心肌炎病毒非结构蛋白2C的原核表达及其反应原性

摘要

针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)非结构蛋白2C基因设计合成了1对特异性引物,通过RT-PCR扩增得到了2C基因片段。将2C基因定向克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中,构建了重组原核表达质粒pGEX-6P-2C,并将其转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经用0.1mmol/LIPTG诱导,成功表达了62ku的目的重组蛋白。Western-blot分析表明,表达的2C重组蛋白可以分别被猪源或兔源抗EMCV阳性血清识别;以浓度为0.5μg/mL的重组蛋白包被聚苯乙烯微量反应板,能够特异性地检测到猪抗EMCV抗体。证明表达的EMCV重组非结构蛋白2C具有良好的反应原性,可以替代EMCV全病毒进行安全、特异、敏感的基于重组诊断抗原的猪脑心肌炎血清学检测技术研究。