骨髓间充质干细胞在C6脑胶质瘤细胞微环境中瘤性转化的生物学分析

摘要

目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在C6脑胶质瘤细胞微环境中是否发生了生物学特性的改变。方法:全骨髓贴壁筛选法分离培养SD大鼠BMSCs,免疫荧光(immunofluorescence,IF)法检测BMSCs表面标志分子CD90+、CD105+、CD45-;活细胞荧光染料CM-Dil标记BMSCs(CM-Dil+BMSCs),流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测标记效率,台盼蓝染色法连续监测BMSCs死亡率;CM-Dil+BMSCs与C6脑胶质瘤细胞直接接触共培养为直接共培养组,BMSCs与C6脑胶质瘤细胞非接触共培养为间接共培养组,阳性对照组为C6脑胶质瘤细胞单独培养,阴性对照组为BMSCs单独培养,培养7 d后,IF法检测各组酸性胶质纤维蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、CD90、CD105表达情况;FCM分选实验组CM-dil+BMSCs和C6脑胶质瘤细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测各组GFAP、PTEN、Bcl-xl、CyclinD1、CD90、CD105基因的表达。结果:①培养至第3代的BMSCs 90%以上表达CD90、CD105且不表达CD45;②IF结果显示直接共培养组、间接共培养组BMSCs细胞表达GFAP水平较阴性对照组BMSCs均增高。③RT-qPCR结果显示直接共培养组、间接共培养组BMSCs细胞GFAP、PTEN、Bcl-xl、CyclinD1基因表达水平较阴性对照组BMSCs明显增高(P0.05);同时,直接共培养组、间接共培养组BMSCs的CD90、CD105基因表达水平较阴性对照组BMSCs显著降低(P<0.05)。结论:BMSCs在C6脑胶质瘤细胞微环境中存在潜在瘤性转化的倾向。