嗜水气单胞菌Ⅵ型分泌系统假定效应蛋白基因tle1^AH的生物学功能

摘要

[目的]本文旨在鉴定和研究嗜水气单胞菌中国流行株NJ-35的Ⅵ型分泌系统(T6SS)新型效应蛋白及其功能,进一步阐明其致病机制。[方法]基于已报道的保守结构域DUF4123,对NJ-35株全基因组序列进行潜在的T6SS效应蛋白基因预测,采用同源重组技术构建基因缺失株和相应互补株。对野生株、缺失株和互补株分别进行细菌竞争试验,并测定细菌生长曲线、运动性、生物被膜形成能力、抗巨噬细胞吞噬能力及其对斑马鱼的半数致死量(LD50)等。[结果]成功预测到假定的效应蛋白基因tle1^AH(U876-17550),并构建tle1^AH基因缺失株(Δtle1^AH)和相应互补株(CΔtle1^AH)。特性分析发现,与野生株比较,缺失株抑制大肠杆菌生长和抗小鼠巨噬细胞吞噬的能力明显降低,生物被膜形成能力增强,对斑马鱼的LD50增加10余倍(P<0.01),互补株各项指标均恢复到野生株水平。[结论]鉴定到嗜水气单胞菌T6SS的一个假定效应蛋白基因(tle1^AH),并对其功能进行初步研究,为进一步探讨T6SS在该菌致病过程中的作用奠定基础。