沉默三联基序蛋白25基因对A549/DDP细胞株顺铂耐药性及凋亡的影响

摘要

目的:三联基序蛋白25(tripartite motif containing 25,TRIM25)为泛素化E3连接酶,通过抑制TRIM25表达,研究其对肺癌顺铂(cis-dichlorodiamine platinum,DDP)耐药细胞株A549/DDP耐药性及凋亡的影响。方法:针对TRIM25基因设计4条不同序列sh RNA,分别构建重组质粒载体pt1、pt2、pt3、pt4。利用脂质体将质粒转染至A549/DDP细胞,采用real-time PCR、Western blot检测抑制效果,MTT实验和流式细胞仪(flow cytometry,FCM)实验分别检测在DDP作用下细胞耐药性改变和凋亡情况。结果:干扰质粒pt1在m RNA和蛋白质水平上均能特异性地抑制TRIM25的表达;MTT法结果显示,抑制TRIM25表达后,干扰组pt1细胞IC50值低于p NC组(P=0.001)及对照组(P=0.000);FCM结果显示,干扰组pt1的细胞凋亡率明显低于p NC组(P=0.005)、对照组(P=0.004)。结论:抑制TRIM25表达后,能有效地降低A549/DDP细胞株的DDP耐药性并促进其凋亡。