小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β和Ret蛋白融合基因的克隆、表达与纯化

摘要

目的构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β(murinemacrophageinflammatoryprotein1β,mMIP-1β)与原癌基因RET的融合基因并构建融合基因mMIP-RET的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达。方法用RT-PCR方法分别扩增mMIP1β和RET的基因片段,利用分子克隆的方法将这两个片段用铰链GGIPG连接,并克隆到表达载体pET22b中。双酶切且测序正确后转化大肠杆菌BL21,构建表达pET22bmMIP1β-RET/His融合蛋白的菌株。经IPTG诱导表达后,ProBondResin进行亲和层析纯化,然后纯化产物进行复性及超滤浓缩。结果成功克隆mMIP1β和RET基因片段;成功地构建了pET22bmMIP1β-RET/His融合蛋白原核表达载体,在大肠杆菌中获得表达,并对表达产物进行了纯化,和Westernblot鉴定。结论成功制备高纯度mMIP1β-Ret/His融合蛋白,为进一步研究修饰的肿瘤抗原的生物学功能奠定了基础。