糜酶介导心脏成纤维细胞增殖中转化生长因子β_1的作用

摘要

目的探讨糜酶对大鼠心脏成纤维细胞（CFs）增殖的影响及其与转化生长因子β1（TGF-β1）信号的关系。方法用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠的CFs，采用四氮唑盐（MTT）比色法（A490值）测定细胞数目，[^3H]脱氧胸腺嘧啶核苷（[^3H]-TdR）掺入法测定CFs的DNA合成速率，逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测TGF-β1的mRNA表达水平。结果糜酶以剂量依赖方式增加CFs数目与DNA合成速率。15、30和60ng／mL糜酶组的A490值分别为0．263±0．033、0．348±0．031和0．387±0．026，均明显高于对照组的A490值（0．201±0．019，P〈0．01）。15、30和60ng／mL糜酶组的[^3H]-TdR掺入率均显著高于对照组（P〈0．01）；糜酶抑制剂预处理抑制糜酶引起的CFs数量与[^3H]-TdR掺入率的增加。糜酶以剂量依赖方式增加CFs的TGF-β1 mRNA表达水平。其中15和30ng／mL糜酶组的TGF-β1 mRNA表达水平分别为0．650±0．040和0．843±0．021，均显著高于对照组（0．417±0．031，P〈0．01）。缬沙坦和PD123319预处理都不影响糜酶引起的CFs数目、[^3H]-TdR掺入率和TGF-β1 mRNA水平的变化。TGF-β1中和抗体预处理却能抑制糜酶引起的CFs A490值和[^3H]-TdR掺入率的变化（P〈0．01）。结论糜酶具有促进大鼠CFs增殖的作用，其机制可能与TGF-β1基因表达上调有关，该作用与血管紧张素Ⅱ途径无关。