刚地弓形虫RH株果糖1,6-二磷酸醛缩酶的基因序列分析与融合表达

摘要

目的:对编码刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株果糖1,6-二磷酸醛缩酶基因进行克隆和 序列分析,并构建原核载体pETcFN融合表达该重组蛋白,以研究该分子在弓形虫速殖子入侵中 的作用。方法:从刚地弓形虫RH株速殖子cDNA中扩增编码果糖1,6-二磷酸醛缩酶的基因,并 克隆到T载体上,测序确认;通过PCGENE及在线工具对此编码序列进行分析;将该基因亚克隆 到表达载体pET30a(+)上,构建质粒pETcFN;表达产物用Western blot进行进一步确认。结果:经 PCR鉴定和质粒双酶切鉴定后测序,确认插入T载体的序列为所需的目的序列。根据序列分析, 推断蛋白的预计分子量为39．2kDa,等电点为7．75;BLAST分析,发现同源性52％以上的序列32 条;模序分析发现其分别在223-233、21-147及15-363位置隐含有与PS00158(ProfileScan)、 PD001128(BlastProDom)及PF00274(HMMPfam)相似的模序,这些序列分子功能均为果糖二磷酸 醛缩酶活性。该编码片段亚克隆到载体上成功构建融合表达质粒pETcFN,转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达,得到分子量为43kDa的融合蛋白。Western bolt的结果与预测相符。