牛免疫缺陷病毒反式激活因子作用机理的研究

摘要

牛免疫缺陷病毒（Ｂｏｖｉｎｅｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ，ＢＩＶ）基因组编码的反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ，Ｔａｔ）可以提高ＢＩＶ长末端重复区（ｌｏｎｇｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔ，ＬＴＲ）启动子的表达。为研究ＢＩＶＴａｔ蛋白的作用机理，分别从ＢＩＶＬＴＲ５′端及３′端构建不同的缺失，从荧光素酶基因（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ，Ｌｕｃ）为报道基因，通过共转染小牛肺细胞检测ＢＩＶＬＴＲ中与Ｔａｔ蛋白反式激活作用相关的序列。转染结果表明ＢＩＶＬＴＲ启动子始于－５２位的上游区不显著影响Ｔａｔ蛋白的激活作用，转录起始点下游的序列与Ｔａｔ蛋白的激活作用密切相关；并且－２－＋３２间的序列为ＢＩＶＴａｔ蛋白靶序列的一部分。将ＢＩＶＬＴＲ启动子下游序列（－２－＋２０４）亚克隆到ＨＩＶ－１ＬＴＲ启动子－５位之后，ＢＩＶＴａｔ蛋白可极大地提高该杂合启动子表达，进一步说明ＢＩＶＴａｔ蛋白的靶序列存在于－２－＋２０４的范围内；同时将ＢＩＶＬＴＲ启动子上游序列（－４１０－－３）接于ＨＩＶ－１ＬＴＲ下游序列（－２－＋７８）之前，ＨＩＶ－１Ｔａｔ蛋白可以激活该杂合启动子表达，说明ＢＩＶＬＴＲ上游序列可以支持ＨＩＶ－?