Nogo-66融合蛋白的原核表达及鉴定

摘要

目的原核表达轴突再生抑制蛋白Nogo-66,并对其进行鉴定。方法采用聚合酶链反应方法从含Nogo-66编码序列的质粒DNA中扩增出Nogo-66基因开放阅读框,构建原核表达载体,转化大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,裂解细菌抽提蛋白,表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western免疫印迹鉴定。结果测序鉴定Nogo-66开放阅读框成功插入pET-46-EK/LIC质粒;重组质粒在大肠杆菌中成功表达大鼠Nogo-66蛋白,SDS-PAGE测定其相对分子质量(Mr)约7000,WesternBlot结果证实表达产物融合有聚组氨酸标签。结论应用原核表达系统成功表达了Nogo-66蛋白,为下一步制备Nogo-66蛋白疫苗及疫苗功能研究打下了基础。